模块化CRISPR筛选可识别导致HIV-1潜伏期的个体和组合途径

谢婷婷，德里克·詹森斯，帕特里克·帕迪森，爱德华·布朗，史蒂夫·海尼科夫，莫莉·欧安勒，迈克尔·埃默曼

发布时间：27年月

抽象

潜伏HIV-1前病毒的转录沉默需要复杂和重叠的机制，这对体内消除HIV-1构成了主要障碍。我们开发了一种新的潜伏期CRISPR筛选策略，称为潜伏期HIV-CRISPR，它使用将编码慢病毒载体基因组的引导RNA包装到出芽病毒粒子的上清液中，作为维持HIV-1潜伏期所涉及的因素的直接读数。我们开发了一个针对表观遗传调控基因的定制指南RNA文库，并将筛选与和不使用潜伏期逆转剂AZD（非规范NFκB通路的激活剂）配对，以检查控制HIV-1潜伏期的机制组合。H4组蛋白乙酰化（NuA4HAT）复合物的核小体乙酰转移酶ING3的组分与AZD协同作用，激活J-Lat细胞系中的前病毒和HIV-4潜伏期的原代CD1+T细胞模型。我们发现ING3的敲除降低了H4组蛋白尾部的乙酰化和HIV-4LTR上的BRD1占有率。然而，ING3敲除的组合伴随着通过AZD激活的非规范NFκB途径，导致HIV-1前病毒上RNA聚合酶II的起始和延伸急剧增加，其方式在所有细胞启动子中几乎是独一无二的。

作者摘要

HIV-1建立了长寿命的潜伏宿主，为根除病毒和治愈HIV提供了屏障。减少潜伏库的一种方法是使用称为潜伏逆转剂（LRA）的小分子来触发免疫介导的病毒产生细胞清除。然而，这种方法受到当前LRA无法重新激活大多数潜伏前病毒和缺乏特异性的限制，突出表明需要更好地了解维持HIV-1潜伏期所涉及的机制的相互作用。我们在潜伏感染的T淋巴细胞（J-Lat）模型中开发了一种基于CRISPR的模块化筛选，称为HIV-CRISPR，以获得HIV-1潜伏期所涉及的途径的全面表示。由于HIV-1的潜在状态由多种平行机制控制，我们使用筛选来研究存在针对转录激活机制的LRA的表观遗传因子。筛选确定了在HIV-1潜伏期的J-Lat和原代T细胞模型中控制HIV-1潜伏期的新因素。

引文：HsiehE，JanssensDH，PaddisonPJ，BrowneEP，HenikoffS，OhAinleM，etal.（）模块化CRISPR筛选可识别导致HIV-1潜伏期的个体和组合途径。公共科学图书馆病理学19（1）：e.

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